Валідація методу LC-MS/MS для визначення 25-гідроксивітаміну D у сироватці крові дітей за стандартами VDSP

Abstract

Мета: верифікація методу LC-MS/MS для визначення 25(OH)D у сироватці крові дітей відповідно до вимог VDSP та порівняння його з методом ECLIA для обґрунтування застосування в гігієнічному моніторингу. Дослідження базувалося на ретроспективній лабораторній базі (понад 70 000 аналізів, 2022–2025 роки) та проспективній репрезентативній вибірці дітей 3–17 років (n=562; 289 хлопчиків, 273 дівчинки) Південного регіону України (2023–2025 роки). Верифікацію LC-MS/MS проводили за чотирма рівнями NIST SRM 972a та критеріями VDSP. Порівняння з ECLIA (Roche Cobas) виконано в підвибірці (n=120) з використанням кореляційного аналізу, регресії PassingBablok, Bland-Altman та ICC. Метод LC-MS/MS показав високу прецизійність (загальний CV ≤7,3%) та правильність (bias від –2,0% до –0,8%), повністю відповідаючи вимогам VDSP. Участь у DEQAS підтвердила стабільність результатів протягом 2022–2025 років. Порівняння з ECLIA виявило високу кореляцію (r=0,97; p<0,001), але систематичне завищення результатів імуноаналізу (+6,5 нмоль/л; 95% LoA: – 6,4 до +19,4 нмоль/л). У дитячій вибірці недостатність 25(OH)D (<50 нмоль/л) становила 71,9%, дефіцит (<30 нмоль/л) – 25,3%, з достовірним погіршенням показників з віком (p<0,001). Метод LC-MS/MS верифіковано за вимогами VDSP/DEQAS і рекомендовано як референтний для гігієнічного моніторингу вітамін D-статусу дітей в Україні. ECLIA систематично завищує рівень 25(OH)D, що слід враховувати в клінічній практиці.

Aim. To verify the LC-MS/MS method for 25-hydroxyvitamin D (25(OH)D) determination in children’s serum according to VDSP requirements, evaluate its analytical performance, and compare it with ECLIA to substantiate its use in hygienic monitoring of pediatric vitamin D status. The study was based on a retrospective laboratory database (>70,000 analyses, 2022–2025) and a prospective representative sample of children aged 3–17 years (n=562; 289 boys, 273 girls) from Southern Ukraine (2023–2025). LC-MS/MS verification was performed using four levels of NIST SRM 972a according to VDSP criteria. Comparison with ECLIA (Roche Cobas) was carried out in a subsample (n=120) using Pearson correlation, Passing-Bablok regression, Bland-Altman analysis, and ICC. The LC-MS/MS method demonstrated high precision (total CV ≤7.3%) and trueness (bias from –2.0% to – 0.8%), fully meeting VDSP requirements. Participation in DEQAS confirmed result stability during 2022–2025. Comparison with ECLIA showed strong correlation (r=0.97; p<0.001) but systematic overestimation by the immunoassay (+6.5 nmol/L; 95% LoA: – 6.4 to +19.4 nmol/L). In the pediatric sample, 25(OH)D insufficiency (<50 nmol/L) was found in 71.9% and deficiency (<30 nmol/L) in 25.3% of children, with a significant age-related decline (p<0.001). The LC-MS/MS method was verified according to VDSP/DEQAS standards and is recommended as the reference method for hygienic monitoring of vitamin D status in Ukrainian children. ECLIA systematically overestimates 25(OH)D levels, requiring adjustment in clinical practice.