Метилювання гена GHSR при неопластичних процесах порожнини рота

Abstract

Аберрантні патерни метилювання ДНК розглядають як чутливі та специфічні маркери раннього канцерогенезу, здатні вдосконалити діагностику злоякісних пухлин. Одним із перспективних епігенетичних показників є гіперметилювання гена рецептора стимулювального гормону росту (GHSR), яке корелює з інвазивністю та несприятливим прогнозом низки онкопроцесів. З огляду на брак даних щодо ролі цього маркера в неопластичних змінах слизової оболонки порожнини рота актуальним є дослідження частоти та діагностичної цінності метилювання GHSR у різних стадіях пухлинної трансформації орофаціальної ділянки. Мета дослідження. Оцінити рівень метилювання першого екзона гена GHSR у зразках тканини раку порожнини рота, передпухлинних уражень і нормальної слизової з метою визначення його потенціалу як біомаркера ранньої діагностики. Методи дослідження. Проаналізовано 79 біоптатів: 35 – раку порожнини рота, 16 – передпухлинних станів, 28 – інтактної слизової. Геномну ДНК виділяли набором GeneJet Genomic DNA Purification Kit; бісульфітне перетворення проводили за допомогою EpiJet Bisulfite Conversion Kit. Ампліфікацію ділянки першого екзона GHSR здійснювали мультиплексною TouchDown-ПЛР із подальшим кількісним піросеквенуванням на системі PyroMark Q96 MD. Статистичну обробку проводили у STATISTICA 6.1 із використанням t-критерію Стьюдента; різницю вважали достовірною за p < 0,01. Наукова новизна. У зразках раку порожнини рота зафіксовано виражене гіперметилювання GHSR (56,6 ± 20,4%), що суттєво перевищувало показники передпухлинних уражень (18,6 ± 6,3%; p ≤ 0,04) та нормальної тканини (4,8 ± 1,1 %; p ≤ 0,025). Розраховані діагностичні характеристики методу продемонстрували 89% специфічність і 99% чутливість щодо виявлення раку порожнини рота. Отримані дані свідчать, що підвищення рівня метилювання GHSR уже на передраковій стадії відображає епігенетичний зсув у напрямі неопластичної трансформації. Висновки. Гіперметилювання першого екзона гена GHSR є інформативним маркером злоякісних і передпухлинних процесів порожнини рота, що може використовуватись у схемах раннього скринінгу та моніторингу прогресії патології. Інтеграція визначення метильованої ДНК GHSR до клінічної практики здатна підвищити точність діагностики та сприяти персоналізації терапевтичних стратегій.

Aberrant DNA-methylation patterns are recognised as sensitive and specific hallmarks of early carcinogenesis and hold considerable promise for improving cancer diagnostics. Hyper-methylation of the growth-hormone secretagogue receptor gene (GHSR) has been linked to tumour invasiveness and poor prognosis in several malignancies, yet its role in oral neoplastic transformation remains unclear. Purpose of the study. To evaluate methylation of exon 1 of the GHSR gene in oral squamouscell carcinoma (OSCC), oral premalignant lesions and normal mucosa, and to assess its diagnostic utility. Research methods. Seventy-nine biopsy specimens were analysed: 35 OSCC, 16 premalignant lesions and 28 samples of healthy oral mucosa. Genomic DNA was purified with the GeneJet Genomic DNA Purification Kit and bisulphite-converted using the EpiJet Bisulfite Conversion Kit. The target region of exon 1 of GHSR was amplified by multiplex TouchDown-PCR and quantified by pyrosequencing on a PyroMark Q96 MD platform. Statistical analysis employed Student’s t-test (STATISTICA 6.1) with significance set at p < 0,01. Scientific novelty. Pronounced hypermethylation of GHSR was detected in OSCC samples (56,6 ± 20,4%), significantly exceeding levels in premalignant tissue (18,6 ± 6,3%; p ≤ 0,04) and normal mucosa (4,8 ± 1,1%; p ≤ 0,025). Diagnostic performance analysis revealed 99% sensitivity and 89% specificity for distinguishing OSCC from healthy tissue. Elevated GHSR methylation in premalignant lesions indicates an early epigenetic shift towards malignant transformation. Conclusions. Hypermethylation of exon 1 of GHSR is an informative biomarker for malignant and premalignant processes in the oral cavity and could be incorporated into early-screening protocols and disease-progression monitoring. Implementation of GHSR methylation assays may enhance diagnostic accuracy and support personalised therapeutic approaches.