Сучасний стан медикаментозної резистентності збудника туберкульозу та можливості її генотипичного визначення

Abstract

Останнім часом для діагностики резистентності Mycobacterium tuberculosis (МБТ) все більше значення набуває метод полімерзно ланцюгової реакції (ПЛР). Тому метою даного дослідження було вивчити розповсюдженість медикаментозної резистентності МБТ та динаміки зміни поширеності мутацій МБТ, що призводять до медикаментозної резистентності, за допомогою ПЛР. Для цього був проведений аналіз бактеріологічних досліджень МБТ на стійкість до протитуберкульозних препаратів Іго ряду у бактеріологічній лабораторії Одеської обласного протитуберкульозного диспансеру (ООПТД) в 2012р. За допомогою ПЛР визначали наявність мутацій в генах katG, inhA, що відповідають за резистентність до ізоніазиду, в гені rpoB, що відповідає за нечутливість до рифампіцину. Отримані дані порівняли з аналогічними даними 2006 року. Протягом 2000-2006рр. в Одеському регіоні спостерігалось збільшення частки резистентних штамів з наступним зниженням у 2012 р. до рівня 2000-2002 рр. У 2012 році 54,8% виділених культур належали до родини Beijing, що характеризується несприятливим перебігом захворювання, у 2006 і 2003 роках цей показник склав 43,0% і 39,6% відповідно. У визначенні медикаментозної резистентності МБТ до ізоніазиду за допомогою ПЛР найбільшу чутливість мала детекція в гені katG і/або гені inhA (100%), найбільшу специфічність – визначення мутації в гені katG (80,1%). Специфічність методу визначення резистентності до рифампіцину шляхом виявлення мутації в гені rpoB склала 87,0%, чутливість – 90,2%. В 2006 році серед ДНК-ізолятів культур МБТ мутація в гені rpoB і katG була виявлена в 44,9% і 54,2% штамів відповідно, водночас згідно даних 2012 р. – в 22,1% і 34,6% відповідно.

Recently a method of polymerase-chain reaction (PCR) is getting more value than before for detection of drug-resistance of Mycobacterium tuberculosis strains (MBT). Thus the goal of the present study was to evaluate the spreading of MBT drugresistance and dynamics of spreading of the mutations, which lead to drug-resistance, in MBT genotype with the help of PCR. It was done an analysis of drug-susceptible tests for Ist line antituberculosis drugs in bacteriological department of Odessa district antituberculosis dispensary in 2012. By the PCR it was done the detection of mutations in katG, inhA genes, which are responsible for isoniazid-resistance, and in rpoB gene that are associated with rifampicin-resistance. The obtained data has been compared with results of 2006 research. According to received data during 2000-2006yy. in Odesa region there was a significant raising of the drugresistance to the Ist-line antituberculosis agents in MBT. In 2012 y. 54,8% of isolates cultures belonged to Beijing family, which is characterized by severe course of tuberculosis (TB), in 2006 and 2003 this index was 43,0% and 39,6% correspondently. During detection of isoniazidresistance of MBT by PCR-method it was found that the finding of mutation in katG and/or inhA gene had the highest sensitivity (100%), while finding of mutation in katG gene had the primary selectivity (80,1%). The sensitivity of rifampicin-resistance investigation by detection of mutations in rpoB gene was 87,0%, the sensitivity – 90,2%. In 2006 y. among DNA-isolates of MBT cultures the level of the mutations in rpoB and katG genes was 44,9% and 54,2% correspondently, in the same time in 2012 y. – it was 22,1% and 34,6% correspondently.

В последнее время для диагностики резистентности Mycobacterium tuberculosis (МБТ) все большее значение приобретает метод полимеразно-цепной реакции (ПЦР). Поэтому целью данной работы было изучение распространения лекарственной резистентности МБТ и динамики изменения распространения мутаций МБТ, приводящих к лекарственной резистентности, с помощью ПЦР. Для этого был проведен анализ бактериологических исследований МБТ относительно устойчивости к противотуберкулезным препаратам Іго ряда в бактериологической лаборатории Одесского областного противотуберкулезного диспансера (ООПТД) в 2012г. С помощью ПЦР определяли наличие мутаций в генах katG, inhA, которые отвечают за резистентность к изониазиду, в гене rpoB, которые ассоциируются с нечувствительностью к рифампицину. Полученные данные сравнивали с аналогичными данными 2006 года. В период 2000-2006 гг. в Одесском регионе наблюдалась увеличение резистентных штаммов с последующим снижением в 2012 г. до уровня 2000-2002 гг. В 2012 году 54,8% выделенных культур принадлежали к семейству Beijing, которое характеризуется неблагоприятным течением заболевания, в 2006 и 2003 роках этот показатель составлял 43,0% и 39,6% соответственно. При определении лекарственной резистентности МБТ к изониазиду с помощью ПЦР, наибольшая чувствительность наблюдалась при детекции мутаций в гене katG и/или гене inhA (100%), наибольшая специфичность – при детекции мутации в гене katG (80,1%). Специфичность метода определения резистентности к рифампицину путем выявления мутаций в гене rpoB составила 87,0%, чувствительность – 90,2%. В 2006 году среди ДНК-изолятов культур МБТ мутация в гене rpoB и katG была выявлена в 44,9% и 54,2% штаммов соответственно, в тоже время согласно данных 2012 г. – в 22,1% и 34,6% соответственно.